（三)电镜免疫细胞化学技术的应用
免疫电镜在细胞超微结构水平应用抗原与相应抗体能特异性结合的原理，使用标记抗体对细胞内存在的抗原性物质进行定性、定位和定量观察，是免疫细胞化学技术在亚细胞水平的进一步发展。
1．免疫电镜标本制备 肾脏组织的免疫电镜标本制备与一般透射电镜标本的制备有所不同，其具体步骤如下：
（1)固定与包埋：肾脏组织一般采用低浓度戊二醛为固定剂，而不使用锇酸，以尽可能多地保存抗原活性，常使用甲醛-戊二醛固定液（甲醛4%，戊二醛0.05%~0.5%)。包埋剂常使用 Lowicryl K4M（丙烯酸酯类化合物)或LRWhite 树脂在-20~35℃低温下包埋，以紫外线照射使之聚合。避免使用常规之环氧树脂包埋，因环氧树脂需加热使之聚合，而使标本之抗原活性下降。
（2)修块、定位及切片：包埋后之组织块经初步修块后，先在超薄切片机上用玻璃刀（勿用钻石刀)切出一张0.5~1μm厚的半薄片，用1%硷性复红或美蓝溶液进行染色，在光镜下观察组织内肾小球的数量及病变情况，挑选出一个病变最为典型的肾小球，作出标记。然后在组织块上定出相应部位，用刀切去周围组织，修成约0.1mm大小之组织块，再用超薄切片机切出500 。A厚度的超薄切片。
（3)免疫标记：目前应用最多的是胶体金标记抗体（详见第七章 )。
2．免疫电镜观察 肾组织标本皆采用包埋后染色，第一抗体为特异性抗血清（如兔抗人IgG)，第二抗体为胶体金标记之抗体（如猪抗兔IgG，金标记Au10)。最后用枸椽酸铅（或醋酸铅)作对照染色，在透射电镜下观察。根据金颗粒的分布状况，可作定位、定性及定量观察，了解肾小球超微结构成分的变化、探讨肾脏疾病的病原及研究免疫复合物（沉积之电子致密物质)的组成成分等（详见后)。
二、血清或肾脏洗脱液的检查
肾脏疾病时，血清学检查亦甚为重要，现仅就与免疫细胞化学有关者介绍如下：
1．血清或肾脏洗脱液内抗肾小球基底膜抗体的测定 在快速进行性肾小球肾炎（RPGN)及Goodpasture综合征病人血清中常存在有抗肾小球基底膜抗体，对病人血清进行检查有重要的诊断意义。动物实验中，对马杉氏肾炎等实验性肾小球肾炎动物，进行肾脏洗脱液的检查，以确定有无抗肾小球基底膜抗体的存在。一般常用免疫细胞化学技术进行检查，先将病人血清与灵长类（如猴等)的肾组织冰冻切片在37℃湿盒内孵育半小时，再将切片用FITC荧光素或HRP标记的抗人Igg 抗体处理。如果病人血清中存在有抗肾小球基底膜抗体，即可与切片上的肾小球基底膜相结合，进一步与荧光标记抗人IgG抗体相反应，而显示沿肾小球毛细血管壁呈连续线形之荧光分布（酶标抗体亦显示同样之连续线形分布)。本方法又可用于与抗肾小管基底膜抗体和抗核抗体的鉴别。
2．血清中循环免疫复合物内IgG亚类的分析 以3%聚乙二醇（PEG)沉淀病人血清中大分子蛋白质，分别使用鼠抗人IgG亚类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的单克隆抗体，以ELISA法测定免疫复合物内IgG亚类的分布状况。以同样方法亦可测定肾小球中沉积的免疫复合物内的IgG亚类。Noel 报道，不同肾炎时肾小球内沉积之IgG亚类有所不同。原发性膜性肾炎之沉积物为Igg 1和IgG4，狼疮性肾炎之沉积物为IgG1、IgG2和IgG3。
3．血清中Tamm-Horsfall糖蛋白（THP)的测定 THP是由肾小管髓袢升支厚壁段及远曲小管上皮细胞合成的糖蛋白，主要存在于正常人的尿中，血清中含有微量。当肾功能减退时，血及尿中THP明显降低，尿毒症时则血及尿中几乎测不出THP。目前可使用抗THP单克隆抗体，用ELISA夹心法测定血清中THP的含量。第一抗体使用鼠抗人THP单克隆抗体，第二抗体为HRP标记的兔抗鼠IgG。
4．其它 血清中自身抗体如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗Sm抗体等的测定，对狼疮性肾炎有诊断意义。抗着丝点抗体的测定对进行性系统性硬化（硬皮病)有诊断意义，以上测定皆使用免疫荧光法，具体操作不再赘述。
