| 公开(公告)号 | CN1908004A |
| 公开(公告)日 | 2007.02.07 |
| 申请(专利)号 | CN200510031955.4 |
| 申请日期 | 2005.08.01 |
| 专利名称 | 鼻咽癌相关基因UBAP1编码蛋白的纯化及其抗体的制备 |
| 主分类号 | C07K1/14(2006.01)I |
| 分类号 | C07K1/14(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;C12P19/34(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中南大学肿瘤研究所 |
| 发明(设计)人 | 李桂源;肖炳燚;曾朝阳;范松青;熊 炜;李小玲;沈守荣;周 鸣;李伟芳 |
| 地址 | 410078湖南省长沙市湘雅路110号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 湖南;43 |
| 主权项 | 一种鼻咽癌相关基因UBAP1编码的蛋白的纯化，采用多聚酶链式反应方法克隆UBAP1基因蛋白编码序列，构建该基因的融合表达质粒，导入大肠杆菌JM109，IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达，用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白，本发明据原核表达载体pGEX-4T-2的GST阅读框架设计引物，使UBAP1基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致；其特征在于：以含UBAP1基因的质粒为模板(0.1μg)，加入上述引物各10pmol进行扩增，回收PCR产物条带；用BamH I、Xhol I分别双酶切PCR回收产物及pGEX-4T-2载体，产生匹配的粘末端。小胶回收试剂回收线性的1.5kb的载体，UBAP1编码区片段。将pGEX-4T-2载体与UBAP1基因连接，构建成符合读框的GST-UBAP1融合基因。用含融合基因的pGEX-4T-2质粒转化大肠杆菌BL21，小量制备质粒DNA，BamH I和Xhol I酶切鉴定是否含插入片段，含插入片段的阳性克隆质粒DNA纯化后用DNA自动测序仪测序。 |
| 摘要 | 一种鼻咽癌相关基因UBAP1编码蛋白的纯化及其抗体的制备，以获得用于鼻咽癌特异性诊断的UBAP1基因诊断试剂盒，属于蛋白质工程领域。本发明采用多聚酶链式反应(PCR)方法克隆UBAP1基因蛋白编码序列，构建该基因的融合表达质粒，导入BL21的大肠杆菌中，IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达，采用谷胱甘肽亲和层析系统纯化融合蛋白，采用多点注射法制备兔多抗，骨髓瘤细胞融合法制备小鼠来源性的抗UBAP1单抗，进而建立检测UBAP1表达水平的免疫组化法以特异地诊断鼻咽癌。 |
| 国际公布 |
