| 公开(公告)号 | CN1904150A |
| 公开(公告)日 | 2007.01.31 |
| 申请(专利)号 | CN200610029646.8 |
| 申请日期 | 2006.08.01 |
| 专利名称 | 一种人胰高血糖素样肽-1衍生物及其固相化学合成 |
| 主分类号 | C40B50/14(2006.01)I |
| 分类号 | C40B50/14(2006.01)I;C40B50/18(2006.01)I;C07K14/47(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 华东师范大学 |
| 发明(设计)人 | 徐 进;黄 静;吴自荣;金 丽;叶海峰;易正芳 |
| 地址 | 200062上海市中山北路3663号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海德昭知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 程宗德;石 昭 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种GLP-1衍生物的固相化学合成方法，其特征在于，具体操作步骤： (1)需用的带保护基的氨基酸单体共有17个，它们是：Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-I le-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-O-OH，其中缩写表示： Fmoc：9-芴基甲氧羰基 Boc：叔丁氧羰基(tert-butyloxycarbonyl) Trt：三苯甲基(trityl) OtBu：叔丁基酯 tBU：叔丁基(tert-butyl) Pbf：2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-苯磺酰基； (2)需用的仪器设备及试剂 仪器：SYMPHONY型12通道多肽合成仪，型号：SYMPHONY，美国产品 试剂：N-甲基吡咯烷酮，二氯甲烷，六氢吡啶，甲醇，二甲氨基吡啶(Dimethylaminopyridine)/DMF N，N-二异丙基乙胺(N，N-diisopropylethylamine)/NMP，HBTU 100mmol/0.5M HOBT in DMFN，N-二环己基碳二亚胺(N，N-Dicyclohexylcarbodiimide)/NMP，其中：DMF为N，N-二甲基甲酰胺 NMP为N-甲基吡咯烷酮 HOBT为1-羟基苯并三唑 HBTU为2-(1氢苯并三唑基)——四甲基脲六氟磷酸盐(2-(1H-benzotriazole-yl-1，3，3-tetramethyl-Uroniumhexafluoropho sphate)； (3)操作： 第一步多肽树脂的合成 以0.25mmol规模为例，称取王氏树脂0.25g，置入SYMPHONY型12通道多肽合成仪上的反应器中，将带保护基的氨基酸单体称取1mmol装瓶，按GLP-1衍生物的氨基酸序列(Seq ID No.2)从C-端向N-端排列在所述的合成仪中，25℃下，由计算机程序控制自动进行脱Fmoc保护、活化、连接，然后再进行下一轮循环，如此完成合成，得到带侧链保护基的多肽树脂，在所述的合成仪上吹干、称重； 第二步脱保护基及切断树脂 将第一步得到的带侧链保护基的多肽树脂置于具塞三角烧瓶，加入下列裂解试剂：┏━━━━━━━┳━━━━━━━┓┃ 试剂 ┃ 用量 ┃┣━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃ 水 ┃ 0.25mL ┃┃ EDT ┃ 0.25mL ┃┃ TIS ┃ 1mL ┃┃ 三氟乙酸 ┃ 9.45mL ┃┗━━━━━━━┻━━━━━━━┛，然后在30℃下，电磁搅拌反应2小时，过滤，收集滤液，树脂用三氟乙酸洗涤，合并收集液与洗涤液，加入乙醚产生沉淀，过滤，沉淀用乙醚洗涤，干燥，得粗品； 第三步HPLC分离纯化、冷冻干燥 将第二步得到的粗品用制备型HPLC进行分离纯化，再经冷冻干燥，得产品GLP-1衍生物。 |
| 摘要 | 一种具有人胰高血糖素样肽-1活性的人胰高血糖素样肽-1衍生物及其制备和应用，属于生物工程技术领域。该衍生物的分子结构式为以下的三种结构式：GLP-1(7-37)-Xaa38(Seq ID No.2)，GLP-1(7-37)-Xaa38-Xaa39(Seq ID No.3)和GLP-1(7-37)-Xaa38-Xaa39-Xaa40(Seq ID No.4)之一，其中Xaa38，Xaa39和Xaa40分别是Cys，Ala，Gly，His，Ser和Thr中的任何一个氨基酸。采用固相化学合成制备该衍生物。该衍生物具有长于GLP-1的半衰期；通过固相化学合成制备，生产步骤少，生产成本低，特别适于在制备治疗糖尿病的药物中作该药物的活性成分。 |
| 国际公布 |
