| 公开(公告)号 | CN1260247C |
| 公开(公告)日 | 2006.06.21 |
| 申请(专利)号 | CN200310108421.8 |
| 申请日期 | 2003.11.05 |
| 专利名称 | 一种用于重组tPA衍生物的大规模包涵体复性纯化技术 |
| 主分类号 | C07K1/113(2006.01)I |
| 分类号 | C07K1/113(2006.01)I;C12N9/72(2006.01)I;C12N9/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 上海中科伍佰豪生物工程有限公司 |
| 发明(设计)人 | 张 毅;陆坚峰;杨胜利;褚仲梅;刘 成;屈贤铭 |
| 地址 | 200233上海市漕宝路500号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海专利商标事务所有限公司 |
| 代理人 | 徐 迅 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种蛋白质复性方法，其特征在于，包括步骤：(a)将目标蛋白质的包涵体溶解，离心获得溶解有包涵体蛋白质的上清液；(b)用第一复性液稀释上清液，形成目标蛋白质的浓度为100-1000微克/毫升的第一稀释溶液，其中，第一复性液含3-7M选自尿素或盐酸胍的变性剂和缓冲液，pH7.5-9.0，并且第一复性液中所含的氧化型谷胱甘肽及还原型谷胱甘肽与目标蛋白质之比为4-10mmol谷胱甘肽：0.1-1mg目标蛋白，且还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽的摩尔比为4-6：0.8-2；(c)在20-28℃下，放置第一稀释溶液16-24小时；(d)用第二复性液稀释第一稀释溶液，形成目标蛋白质的浓度为10-100微克/毫升的第二稀释溶液，其中，第二复性液含0.1-2.5M尿素和缓冲液，pH7.5-9.0：(e)在20-28℃下，放置第二稀释溶液16-24小时；(f)过滤第二稀释溶液，将滤液体积超滤浓缩为原体积的1/8-1/40，获得第一浓缩滤液；(g)过滤第一浓缩滤液，然后将滤液稀释于3-7倍体积的pH调节缓冲液中，所述的pH调节缓冲液含有10-100mM醋酸碱土金属盐或醋酸铵，pH4.0-5.5；(h)过滤步骤(g)的稀释溶液，将溶液体积超滤浓缩为原体积的1/3-1/10，获得含有复性的目标蛋白的第二浓缩滤液。 |
| 摘要 | 本发明提供了一种蛋白质复性方法，包括步骤：(a)将目标蛋白质的包涵体溶解，离心获得溶解有包涵体蛋白质的上清液；(b)用第一复性液稀释，其中第一复性液含氧化还原对；(c)放置一段时间；(d)用第二复性液稀释，第二复性液不含氧化还原对；(e)放置一段时间；(f)过滤、浓缩，获得第一浓缩滤液；(g)过滤，然后将滤液稀释于pH调节缓冲液中，调节pH至4.0-5.5；(h)过滤步骤(g)的稀释溶液，浓缩获得含有复性的目标蛋白的第二浓缩滤液。本发明复性方法成本低，用于大肠杆菌表达的重组tPA或其衍生物的低成本的重组蛋白质。 |
| 国际公布 |
