| 公开(公告)号 | CN1706942A |
| 公开(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申请(专利)号 | CN200410055548.2 |
| 申请日期 | 2004.08.04 |
| 专利名称 | 抑制血管生成及肿瘤生长和转移的Kringle变体蛋白制备方法及应用 |
| 主分类号 | C12N9/72 |
| 分类号 | C12N9/72;C12N15/70;C12N15/52;A61K38/49 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 2004.6.4 CN 200410044914.4 |
| 申请(专利权)人 | 南京大学 |
| 发明(设计)人 | 刘建宁;张 菁;陈于红;周颖江 |
| 地址 | 210093江苏省南京市汉口路22号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京天华专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 夏 平 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 一种具有抑制血管生成及肿瘤生长和转移的尿激酶原Kringle结构域变体蛋白的制备方法，其特征是：a.用PCR方法扩增出编码尿激酶原Kringle结构域的基因片段，用NdeI和BamHI双酶切后插入到pET29a质粒，构建成重组质粒pET29a-UKK；b.通过化学合成方法合成需要替换的脱氧核糖核苷酸序列，并在两端分别加上NcoI和PstI酶切位点，插入到重组质粒pET29a-UKK，构建成含有尿激酶原Kringle结构域变体蛋白编码序列的重组质粒pET29a-mUKK；c.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后涂板，挑取单克隆至LB(卡那霉素抗性)中，培养过夜，转接后继续培养，再经诱导得到菌体；d.离心收集菌体，超声破菌，离心取上清过Ni-NTA亲和柱，对洗脱液中的目的蛋白进行复性，并用CM离子交换柱进一步纯化，获得高纯度的目的蛋白。 |
| 摘要 | 本发明属于生物制药领域中应用基因工程技术生产蛋白质药物的范畴。本发明公开了一种新的具有抑制血管生成及肿瘤生长和转移的尿激酶原Kringle结构域变体蛋白mUKK的制备方法和应用。其制备方法是用基因工程技术构建了表达mUKK的重组质粒，并实现了在大肠杆菌中的高效表达，经分离纯化后获得高纯度的具有抑制血管生成及肿瘤生长和转移的蛋白质药物，可用于肿瘤、肥胖、糖尿病和心脑血管疾病等血管生成异常相关的疾病的治疗。 |
| 国际公布 |
