| 公开(公告)号 | CN1706946A |
| 公开(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申请(专利)号 | CN200410055550.X |
| 申请日期 | 2004.08.04 |
| 专利名称 | 重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定方法 |
| 主分类号 | C12N15/12 |
| 分类号 | C12N15/12;C12N15/16;C12N15/70;C07K1/14;C07K14/435;C07K14/575;C07H21/00;G01N33/68;G01N33/74 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 2004.6.4 CN 200410044915.9 |
| 申请(专利权)人 | 南京大学 |
| 发明(设计)人 | 刘建宁;孙自勇;陈均勇;张 菁;吴 盛 |
| 地址 | 210093江苏省南京市汉口路22号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京天华专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 夏 平 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 一种重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定方法，其特征在于：在DNA水平的重组人胸腺肽α1质粒的构建；目的基因在大肠杆菌系统中的表达；利用Zn-Sepharose亲和层析柱对目标蛋白的纯化；以及使用胸腺细胞对重组人胸腺肽进行体外活性鉴定。 |
| 摘要 | 本发明涉及医药生物工程技术领域，是一种重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定方法。本发明用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中，经过KpnI/SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn-Sepharose亲和层析纯化以及复性处理，从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白-胸腺肽α1融合蛋白。经凝血因子Xa酶切、Zn-Sepharose亲和层析以及反向高效液相色谱纯化获得3.8mg重组人胸腺肽。小鼠胸腺细胞凋亡实验表明，重组人胸腺肽能显著地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡，且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系。 |
| 国际公布 |
