| 公开(公告)号 | CN1211400C |
| 公开(公告)日 | 2005.07.20 |
| 申请(专利)号 | CN01141897.4 |
| 申请日期 | 2001.09.18 |
| 专利名称 | 人血小板糖蛋白GPIbα的制备方法及其专用引物 |
| 主分类号 | C07K14/435 |
| 分类号 | C07K14/435;C12N15/09;C12N15/11;C12P21/02 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 |
| 发明(设计)人 | 张克强;王字玲;王波 |
| 地址 | 100850 北京市海淀区太平路27号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京纪凯知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 关畅 |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种制备人血小板糖蛋白GPIbα的方法，包括以下步骤：1)合成引物：上游：5’-CGCGGATCCATGCCTCTCCTCCTCTTGCTG-3’下游：5’-CCGGAATTCTCAGAGGCTGTGGCCAGAGTACC-3’；2)以细胞总RNA为模板利用RT-PCR钓取GPIbα的全长cDNA；所述细胞是人红白血病细胞系TF-I细胞株；所述RT-PCR的条件是：50℃，30Min；94℃，2Min；94℃变性45s，50℃退火45s，68℃延伸2Min，10个循环；后在94℃变性45s，58℃退火45s，68℃延伸2Min，25个循环；68℃延伸7Min；3)将全长cDNA插入经BamHI和EcoRI双酶切处理后的真核表达质粒pcDNA3.1(+)，获得重组真核表达质粒pcDNA3.1-GPF；4)将重组质粒导入真核细胞中；5)培养转染细胞；6)收集转染细胞分泌的人血小板糖蛋白GPIbα，以凝血酶亲合柱纯化，得到产品。 |
| 摘要 | 本发明公开了人血小板糖蛋白GPIbα的制备方法及其专用引物。本发明提供的制备人血小板糖蛋白GPIbα的方法，包括以下步骤：1)合成引物：上游：5’-CGCGGATCCATGCCTCTCCTCCTCTTGCTG-3’；下游：5’-CCGGAATTCTCAGAGGCTGTGGC CAGAGTACC-3’；2)以细胞总RNA为模板利用RT-PCR钓取GPIbα的全长cDNA；3)将全长cDNA插入经BamH I和EcoR I双酶酶切处理后的真核表达质粒pcDNA3.1(+)，获得真核表达重组质粒pcDNA3.1-GPF；4)将重组质粒导入真核细胞中；5)培养转染细胞；6)收集转染细胞分泌的人血小板糖蛋白GPIbα，以凝血酶亲合柱纯化，得到产品。本发明为进一步开发新型血小板代用品以及诊断、检测和治疗血管内创伤的诊断试剂提供了坚实的理论及必要的原材料基础。 |
| 国际公布 |
