| 公开(公告)号 | CN1195062C |
| 公开(公告)日 | 2005.03.30 |
| 申请(专利)号 | CN03100415.6 |
| 申请日期 | 2003.01.13 |
| 专利名称 | 非抗生素抗性穿梭质粒表达载体及其构建方法和应用 |
| 主分类号 | C12N15/64 |
| 分类号 | C12N15/64;C12N15/65;C12N15/74;C12N15/70;C12N1/21;A23C9/123;A61K35/74;A23K1/16;A61P1/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 王春凤;孙哲 |
| 发明(设计)人 | 王春凤;秦泽荣;孙哲;刘尚高 |
| 地址 | 130118 吉林省长春市南关区南环路东吉林农业大学动物科技学院 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 长春科宇专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 李恩庆 |
| 国省代码 | 吉林;22 |
| 主权项 | 一种非抗生素抗性穿梭质粒表达载体，其特征是：首先，对原始质粒表达载体pMG26e用限制性内切酶进行酶切；其次，针对原始质粒表达载体pMG26e多克隆酶切位点情况，设计特定连接末端扩增非抗生素抗性选择基因NASG；再次，将扩增得到的非抗生素抗性选择基因NASG连接到特定位置；最后，用限制性内切酶彻底去除原始质粒载体pMG26e中的抗生素红霉素基因并环化得到质粒载体pMG425t；pMG425t不含有抗生素抗性基因，在革蓝氏阳性细菌和革蓝氏阴行细菌之间穿梭表达成为质粒表达载体。 |
| 摘要 | 本发明属于生物工程技术领域，是一种非抗生素抗性穿梭质粒表达载体及构建方法和应用。本发明是把基本质粒载体pMG36e，经限制性内切酶EcoR I在其酶切位点上酶切，成为线型。在近红霉素Er端连接非抗生素抗性基因，之后环化回环状。再在这个环上把红霉素基因Er用内切酶去除，形成非抗生素抗性穿梭表达质粒载体。将人或动物疾病的保护性抗原基因连接入本发明的非抗生素抗性质粒载体，可以制造功能性食品，对特定疾病具有预防、保护作用的细菌悬液、口服补剂、管饲产品以及动物性疫苗。本发明用非抗生素可行基因替代红霉素基因，在使用过程中不存在抗生素抗性基因扩散的问题，避免通过质粒载体的转移而引起的抗生素抗性基因扩散问题。 |
| 国际公布 |
