| 公开(公告)号 | CN1188524C |
| 公开(公告)日 | 2005.02.09 |
| 申请(专利)号 | CN01107600.3 |
| 申请日期 | 2001.02.28 |
| 专利名称 | 人SP－A1在pichia pastoris中的表达 |
| 主分类号 | C12N15/81 |
| 分类号 | C12N15/81;C12N15/12;//(C12N15/81,C12R1:84) |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 珠江医院 |
| 发明(设计)人 | 封志纯;兰和魁 |
| 地址 | 510282 广东省广州市工业大道中253号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州知友专利代理有限公司 |
| 代理人 | 刘小敏 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 人SP-A1在pichiapastoris中的表达方法，其特征是：将人SP-A1基因克隆至表达载体中，通过电击转化技术转入P.pastoris，并从转化菌株中筛选出多拷贝转化子，用高表达的甲醇氧化酶1基因(AOX1)启动子、利用甲醇作为唯一碳源诱导对重组P.pastoris进行表达；其中，在所述的人SP-A1基因表达载体的构建中，所设计的扩增引物为：(+)5’-GATACGTAATGTGGCTGTGCCCTCTG-3’(-)5’-GCGGAATTCGAACTCACAGATGGTCAG-3’；所述的电击转化参数为1500V、25μF、400Ω；所述的甲醇浓度为0.1～0％(g/ml)。 |
| 摘要 | 本发明公开了人SP-A1在Pichia pastoris中的表达，该方法将人SP-A1基因克隆至表达载体中，通过电击转化技术转入Pichia.pastoris，并从转化菌株中筛选出多拷贝转化子，用高表达的甲醇氧化酶1基因(AOX1)启动子、利用甲醇作为唯一碳源诱导对重组P.pastoris进行表达；在所述的诱导表达中，甲醇浓度为0.1～1.0％(g/ml)。本发明能生产大量、高活性的人SP-A1，其最大表达量可达150mg/L，而且所表达的目的蛋白质能对巨噬细胞杀伤病原体发挥调理作用。 |
| 国际公布 |
