| 公开(公告)号 | CN1161461C |
| 公开(公告)日 | 2004.08.11 |
| 申请(专利)号 | CN01123246.3 |
| 申请日期 | 2001.07.20 |
| 专利名称 | 碱性磷酸酶在酵母中的表达 |
| 主分类号 | C12N9/16 |
| 分类号 | C12N9/16;C12N15/63;C12N15/81;C12N1/16;//(C12N9/16,C12R1:84,1:78) |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 2000.7.25 DE 10036491.8 |
| 申请(专利权)人 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 |
| 发明(设计)人 | R·米勒;J·P·塔尔霍菲;F·盖佩 |
| 地址 | 瑞士巴塞尔 |
| 颁证日 | 2004.08.11 |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 中国专利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 张广育;姜建成 |
| 国省代码 | 瑞士;CH |
| 主权项 | 在酵母细胞中生产真核碱性磷酸酶的方法，包括以下步骤：a)克隆一种为在酵母中表达而进行了密码子优化的基因序列进入不同的载体，该基因序列编码比活性高于3000U/mg的真核碱性磷酸酶，b)转化酵母，c)表达，以及d)纯化碱性磷酸酶，其中-第一载体具有针对第一选择标记的抗性基因，-通过在含有低浓度第一选择标记的营养培养基中生长来选择抗性基因和基因序列已经整合到基因组的转化子，-通过多重转化增加基因拷贝数，其中多重转化子通过在选择压力增加的营养培养基中生长来选择，-加入具有针对第二选择标记的抗性基因的第二载体，-通过第二载体的多重转化增加基因拷贝数，其中多重转化子通过在选择压力增加的营养培养基中生长来选择，-选择已经以稳定方式整合了几个拷贝的基因序列和选择标记抗性基因的克隆。 |
| 摘要 | 本发明涉及在酵母细胞中重组生产和表达真核碱性磷酸酶的方法，其中使用编码比活性高于3000U/mg的高活性真核碱性磷酸酶的DNA。本发明还涉及将相应核酸序列插入在甲基营养型酵母菌株中表达的载体中的方法，以及合适的载体和宿主菌株。 |
| 国际公布 |
