| 公开(公告)号 | CN1158388C |
| 公开(公告)日 | 2004.07.21 |
| 申请(专利)号 | CN01131736.1 |
| 申请日期 | 2001.09.29 |
| 专利名称 | 连续灌流式培养杂交瘤细胞制备抗体的方法 |
| 主分类号 | C12P21/00 |
| 分类号 | C12P21/00;C12N5/12 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 陈志南 |
| 发明(设计)人 | 米力;李玲;冯强;余晓玲 |
| 地址 | 陕西省西安市雁塔路11号南段专利中心毛淑霞转 |
| 颁证日 | 2004.07.21 |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 西安文盛专利代理有限公司 |
| 代理人 | 毛淑霞 |
| 国省代码 | 陕西;61 |
| 主权项 | 一种连续灌流式培养杂交瘤细胞制备抗体的方法，它主要由接种细胞-连续灌流培养-检测方法-细胞代谢、生长速率、产物合成平衡调控分析一产物回收纯化过程完成，其特征是接种细胞是采用固定床填充巨载体，接种细胞密度应大于2-3×105/ml；细胞代谢、生长速率、产物合成平衡调控是通过在线监测葡萄糖、乳酸、谷氨酸、谷氨酰胺、耗氧速率OUR以及pH值指标获得，同时监测细胞比生长速率、抗体比生成速率及氨基酸消耗量，在细胞由对数生长期进入衰退期之前，即主要指标是ΔOUR＜0.1mmol/l/h，葡萄糖消耗大于50％，添加相应的氨基酸，并降低葡萄糖和血清浓度，以及控制灌流量，使细胞由以生长代谢为主转为以产物合成为主，进入稳态培养，其中，添加的相应氨基酸包括必需氨基酸和非必需氨基酸，添加氨基酸的量由相应细胞和产物所消耗氨基酸的量而补加，降低葡萄糖和血清的浓度采用逐渐递减方式，使其进入稳态培养的指标，即乳酸生成速率与葡萄糖消耗速率比值保持较低水平，保证细胞比生长速率μ相对恒定；产物回收纯是采用Streamline SP介质，一步回收培养上清中的抗体，DEAE-Sepharose FF阴离子交换剂去除纯化后抗体产品中的热源质，抗体成品冻干保存。 |
| 摘要 | 该连续灌流式培养杂交瘤细胞制备抗体的方法，由接种细胞—连续灌流培养—检测方法—细胞代谢、生长速率、产物合成平衡调控分析—产物回收纯化过程完成，接种细胞是采用固定床填充巨载体，细胞代谢、生长速率、产物合成平衡调控是对葡萄糖、乳酸---以及pH值等指标进行分析，在细胞由对数生长期进入衰退期之前，添加相应的氨基酸，并降低葡萄糖和血清浓度，细胞由以生长代谢为主转为以产物合成为主，进入稳态培养，此方法反复应用，实现多个稳态，达到高密度、高产量的长期培养；产物回收纯化是采用Streamline SP介质，一步回收培养上清中的抗体，DEAE-Sepharose FF阴离子交换剂去除纯化后抗体产品中的热源质，成品冻干。 |
| 国际公布 |
