| 公开(公告)号 | CN1117160C |
| 公开(公告)日 | 2003.08.06 |
| 申请(专利)号 | CN96198949.1 |
| 申请日期 | 1996.11.28 |
| 专利名称 | 通过高细胞密度发酵在大肠杆菌中制备重组蛋白质的方法 |
| 主分类号 | C12P21/02 |
| 分类号 | C12P21/02;C12N15/72;C12N1/21;C07K16/28;//(C12N1/21,C12R1:19) |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 1995.12.11 EP 95119478.6 |
| 申请(专利权)人 | 默克专利股份有限公司 |
| 发明(设计)人 | W·斯特里特马特;S·马特兹库;D·里森伯格;U·霍恩;U·克努非尔;M·库加;R·温德斯;A·普鲁克图恩;A·克里博 |
| 地址 | 联邦德国达姆施塔特 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | PCT/EP96/05260 1996.11.28 |
| 进入国家日期 | 1998.06.11 |
| 专利代理机构 | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 |
| 代理人 | 陈文平 |
| 国省代码 | 德国;DE |
| 主权项 | 借助有分批发酵和分批补料阶段的高细胞密度发酵，在已用携带外来基因和可诱导启动子的质粒转化的大肠杆菌细胞中制备外源蛋白质的方法，其中没有底物或代谢副产物对生长的限制，并从培养基中分离和纯化所表达的蛋白质，使用连续的、自动或半自动分析法及加料系统控制分批补料期的底物浓度，其特征在于在分批补料期中，(i)培养基中碳源的浓度保持恒定在0.1g/L至25g/L范围内，同时维持细胞不受限制的生长即μ＝μmax，(ii)当细胞密度为10至80g/L时经诱导启动子在所说的分批补料期中开始外源蛋白质的产生，和(iii)在已诱发产物合成后，持续地供入可利用的氮和磷酸盐，以及微量元素的盐，及(iv)在整个分批补料期内，经以适当方式向发酵液内通入氧气而将pO2调整到5至25％。 |
| 摘要 | 本发明涉及用大肠杆菌的宿主-载体系统有效地生成重组蛋白质，特别是重组抗体分子，最好是抗体片段如小抗体的补料分批发酵方法。在给定的条件下，大肠杆菌细胞能够以最大比生长速度生长至非常高的细胞密度。当重组产物生成开始时，只有所生成的产物以限制方式作用于生长。不发生因底物或代谢副产物造成的生长限制。因此，能在特定空间和时间内大量产生重组蛋白质。 |
| 国际公布 | WO97/21829 德 1997.6.19 |
