| 公开(公告)号 | CN100347307C |
| 公开(公告)日 | 2007.11.07 |
| 申请(专利)号 | CN200510042989.3 |
| 申请日期 | 2005.07.25 |
| 专利名称 | 重组嵌合分子Cb1-Grb2(SH2)-RING真核表达质粒及抗肿瘤基因药物用途 |
| 主分类号 | C12N15/79(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/79(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 发明(设计)人 | 李 霞;张 璟;刘新平;药立波 |
| 地址 | 710032陕西省西安市长乐西路17号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 李郑建 |
| 国省代码 | 陕西;61 |
| 主权项 | 重组嵌合分子Cbl-Grb2(SH2)-RING真核表达载体的构建方法，其特征在于： 首先将BamHI引入CblN基因的SH2N端，获得CblN(BamHI)；以CblN(BamHI)为模板，同法将EcoRV引入CblN基因的SH2C端获得CblN(BamHI+EcoRV)； 将CblN(BamHI+EcoRV)克隆入pGEM-Teasy载体进行测序，测序正确后利用KpnI/XhoI酶切并将其插入到pcDNA3.1(+)真核表达载体的KpnI/XhoI酶切位点之间，即得到pcDNA3.1(+)-CblN(BamHI+EcoRV)； 再以SK-BR-3细胞的cDNA为模板，设计引物扩增得到Grb2SH2基因片段并克隆到pGEM-Teasy载体中，酶切鉴定及测序证实序列正确后，以BamHI和EcoRv双酶切将Grb2SH2基因片段切出，并将经同样酶切的pcDNA3.1(+)-CblN(BamHI+EcoRv)载体片断分别回收，两片段经T4连接酶进行连接反应，连接产物转化感受态细胞DH5α，挑取单克隆培养过夜，提取质粒，经BamHI和EcoRv双酶切鉴定后，对获得预期大小的插入片段的载体再进行测序证实，命名为pcDNA3.1(+)-Cbl-Grb2(SH2)-RING，即为重组嵌合分子Cbl-Grb2(SH2)-RING的真核表达质粒。 |
| 摘要 | 本发明公开了重组嵌合Cb1泛素连接酶Cb1-Grb2(SH2)-RING真核表达载体的构建方法，所构建的表达质粒pcDNA3.1(+)-Cb1-Grb7(SH2)-RING能够作为抗HER2阳性肿瘤的基因药物。经实验证明：重组嵌合分子Cb1-Grb2(SH2)-RING真核表达质粒转染HER2阳性乳腺癌细胞系SK-BR-3后，通过与HER2蛋白结合并促进其泛素化、下调，能够有效抑制与HER2过度活化有关的细胞的增殖，因而具有抗HER2阳性肿瘤的用途。 |
| 国际公布 |
