| 公开(公告)号 | CN101096657A |
| 公开(公告)日 | 2008.01.02 |
| 申请(专利)号 | CN200710126178.0 |
| 申请日期 | 2007.06.14 |
| 专利名称 | 抗Asial型口蹄疫病毒的单克隆抗体的制备方法及用途 |
| 主分类号 | C12N5/18(2006.01)I |
| 分类号 | C12N5/18(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;G01N33/577(2006.01)I;G01N33/569(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 发明(设计)人 | 常惠芸;邵军军;林 彤;李克生;杜惠芬;独军政;丛国正;周广青;谢庆阁 |
| 地址 | 730046甘肃省兰州市盐场堡徐家坪1号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 兰州振华专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 张 晋 |
| 国省代码 | 甘肃;62 |
| 主权项 | 抗Asial型口蹄疫病毒的单克隆抗体的制备方法，其特征在于用Asial型口蹄疫病毒的总mRNA为模板，设计引物进行反转录和聚合酶链式反应，获得Asial型口蹄疫病毒衣壳蛋白的基因VP1，再将VP1插入原核表达载体中得到重组表达质粒，用重组表达质粒转化大肠杆菌得到重组表达载体的大肠杆菌菌株，将菌体超声破碎后除杂蛋白，层析法纯化得到表达的重组蛋白，用重组蛋白给健康小鼠皮下注射进行免疫，取免疫后小鼠的脾脏获得脾细胞，再经分散处理后离心得到脾细胞沉淀，取从小鼠中已得到的X-63、NS-1或SP2/0细胞系，在常规培养液中培养3～4天后，离心去上清液得到骨髓瘤细胞沉淀，用1640培养液悬浮上述脾细胞沉淀和骨髓瘤细胞沉淀，并将脾细胞和骨髓瘤细胞按数量比5～10∶1混合两种细胞，然后离心去上清液，充分分散沉淀物，沉淀物中按体积比1∶2加入浓度为50％的聚乙二醇PEG4000，静置1～2分钟后离心去上清液，在沉淀物中缓慢加入沉淀物体积的25～35倍的HAT培养液，再将融合细胞按100μl/孔加入至96孔培养板中，每孔中再加100μl用HAT培养液洗取的小鼠腹腔巨噬细胞作为饲养细胞，得到抗Asial型口蹄疫病毒抗体的杂交瘤细胞，再将杂交瘤细胞转移到另一块96孔板中进行克隆，得到杂交瘤细胞株，再用常规培养液培养上述所得到的杂交瘤细胞株，取培养液用硫酸铵沉淀和凝胶层析法进行纯化得到抗Asial型口蹄疫病毒的单克隆抗体。 |
| 摘要 | 本发明公开一种用于抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体的制备方法，用这种方法制备的抗体，和这种抗体的用途。本发明的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体的制备方法是：用Asia1型口蹄疫病毒的总mRNA为模板，获得Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白的基因VP1，用VP1制备重组表达质粒，用重组表达质粒转化大肠杆菌菌株得重组蛋白，再用重组蛋白制备并获得骨髓瘤细胞及杂交瘤细胞，将杂交瘤进行克隆纯化，最终得到抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体。 |
| 国际公布 |
