| 公开(公告)号 | CN101139387A |
| 公开(公告)日 | 2008.03.12 |
| 申请(专利)号 | CN200710029286.6 |
| 申请日期 | 2007.07.20 |
| 专利名称 | 一种重组可溶性人FGFR2胞外段及其生产方法与应用 |
| 主分类号 | C07K14/47(2006.01)I |
| 分类号 | C07K14/47(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K36/17(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 暨南大学 |
| 发明(设计)人 | 洪 岸;汪 炬;张志成 |
| 地址 | 510630广东省广州市天河区石牌 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州粤高专利代理有限公司 |
| 代理人 | 陈 卫 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种重组可溶性人FGFR2胞外段的生产方法，其特征在于包括如下步骤： (1)目的基因截短型FGFR2的构建； 根据截短型FGFR2胞外段氨基酸序列，按照大肠杆菌密码子偏好性原则设计四对引物，四对引物序列分别如序列表NO：1～NO：4所示，由内而外分别进行四轮重叠延伸扩增，首先是F1、R1互为模版扩增，然后以第一轮产物作为模版，F1、R1作为引物进行下一轮的扩增，如此进行4轮扩增； (2)FGFR2双突变型的构建； 针对S252W和P253R双突变的引物称为M252+253_F和M252+253_R，序列如序列表NO：5所示； (3)双酶切FGFR2基因与载体，连接构建重组载体，转化宿主菌，构建FGFR2基因工程菌； (4)培养FGFR2基因工程菌，分离、清洗、溶解包涵体得到包涵体溶解液； (5)纯化包涵体； (6)复性； (7)超滤、冻干得到可溶性人FGFR2胞外段。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种重组可溶性人FGFR2胞外段及其生产方法与应用。本发明在通过大肠杆菌高效表达FGFR2的基础上，对影响其复性效率的各种因素进行了定性定量研究，确定了重组人可溶性人FGF受体胞外段体外变复性的较为合适的方法，使其复性效率达到10％～20％，且成本低、周期短、适合大规模生产。本发明利用游离的FGFRs的胞外段与血液及肿瘤组织中的FGFs结合，降低了游离FGFs的水平，从而竞争性抑制了FGFs的信号，有效抑制了肿瘤的增殖、转移以及血管形成，并以S252W+P253R双突变型FGFR2胞外段的效果最佳。 |
| 国际公布 |
