| 公开(公告)号 | CN1861796A |
| 公开(公告)日 | 2006.11.15 |
| 申请(专利)号 | CN200510009978.5 |
| 申请日期 | 2005.05.13 |
| 专利名称 | 制备用于在大肠杆菌和昆虫细胞中表达鸭α-干扰素基因的方法 |
| 主分类号 | C12N15/70(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/70(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/21(2006.01)I;C12N15/866(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 东北农业大学 |
| 发明(设计)人 | 王君伟;任桂萍;许丽娜;李洪涛 |
| 地址 | 150030黑龙江省哈尔滨市香坊区木林街59号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司 |
| 代理人 | 祖玉清 |
| 国省代码 | 黑龙江;23 |
| 主权项 | 制备用于在大肠杆菌和昆虫细胞中表达鸭α-干扰素基因的方法，其特征是： (1)用淋巴细胞分离液分离鸭外周血单核细胞，植物血凝素诱导培养鸭外周血单核细胞，收获诱导培养的细胞，用Trizol试剂提取细胞总RNA； (2)设计扩增鸭α-干扰素基因的特异性引物，如下： 上游引物P1 20bp：5′-GCACAACCCAGGATCCACCA-3′，引入BamH I酶切位点； 下游引物P2 19bp：5′-GTGCGCGTGTGGGGTACCT-3′； (3)利用RT-PCR技术扩增鸭α-干扰素基因； (4)对鸭α-干扰素基因进行克隆、测序鉴定； (5)利用BamH I、Sal I这两个多克隆位点，将鸭α-干扰素基因定向亚克隆至原核表达载体pET30a和昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A上； (6)重组表达质粒pET30a-DuIFN-α转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS； (7)确定原核表达系统中表达鸭α-干扰素的最佳诱导时间和IPTG浓度； (8)鸭α-干扰素在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中的诱导表达； (9)重组表达质粒pBlueBacHis2A-DuIFN-α与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞Sf9细胞株； (10)噬斑分析筛选重组病毒； (11)确定真核表达系统中表达重组鸭α-干扰素的最佳表达时间和感染复数； (12)按最佳表达时间和MOI接种病毒，感染Sf9细胞，在Sf9细胞中表达鸭α-干扰素。 |
| 摘要 | 本发明涉及制备用于在大肠杆菌和昆虫细胞中表达鸭α-干扰素基因的方法。包括编码鸭α-干扰素的基因的克隆，含鸭α-干扰素基因的原核表达载体和重组昆虫杆状病毒转染载体的构建，用所述含鸭α-干扰素基因的重组原核表达载体转化大肠杆菌和诱导表达，用所述含鸭α-干扰素基因的重组杆状病毒转染昆虫细胞及在昆虫细胞中的表达等。通过本方法制备的产品为研究鸭α-干扰素生物活性及其作用机理提供了基础，也可制备成抗病毒的药物。 |
| 国际公布 |
