| 公开(公告)号 | CN1807638A |
| 公开(公告)日 | 2006.07.26 |
| 申请(专利)号 | CN200510062387.4 |
| 申请日期 | 2005.12.31 |
| 专利名称 | 靶向抗肺癌SOD的构建与表达的方法 |
| 主分类号 | C12N15/53(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/53(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C12N9/08(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 浙江大学 |
| 发明(设计)人 | 龚兴国 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市西湖区玉古路20号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 杭州中成专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 唐银益 |
| 国省代码 | 浙江;33 |
| 主权项 | 一种抗肺癌SOD的构建的方法，其特征在于依次包括以下步骤： (1)从含念珠藻CHENFe-SOD(NostoccommunestrainCHENFe-SOD)的pET-SOD质粒中TD-PCR扩增获得Fe-SOD基因； TD-PCR扩增所用引物： SOD-Nco：5’-CATGCCATGGCATTTGTACAGCTCCCACTACCCTTTG含NcoI位点， SOD-Sal：5’-GCGTCGACTCCGCCTCCACCAGCTTTGGCCAAGTTTTC含SalI位点， 引物SOD-Sal去除Fe-SOD基因序列3’端的TAA终止密码子，并在其末端加上编码GGGG的密码子，即：GGCGGAGGCGGA； (2)以含ScFv的T-ScFv质粒为模板TD-PCR扩增获得ScFv基因； TD-PCR扩增所用引物： ScFv-Sal：5’-ACGCGTCGACGTCCAACTGCAGGAGTCAGG含SalI位点， ScFv-Not：5’-ATAAGAATGCGGCCGCCTATTTGATCTCGAGCTTGGTC含NotI位点； 引物ScFv-Not末端含TAG终止密码子； (3)以NcoI，SalI酶切步骤(1)得到的Fe-SOD基因； (4)以SalI，NotI酶切步骤(2)得到的ScFv基因； (5)将步骤(3)和(4)得到的基因重组得到SOD-ScFv融合基因，并重组进经NcoI，NotI酶切的pET28a(+)质粒载体，控制此融合基因5’端与T7启动子之间的距离，构建得到Pet-SOD-ScFv融合载体； (6)将Pet-SOD-ScFv融合载体转化至感受态大肠杆菌BL21，命名为Pet-SOD-ScFv工程菌。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种pET-SOD工程菌的构建及其表达纯化方法，本发明通过下述技术方案予以实现：设计引物从含念珠藻CHEN Fe-SOD的pET-SOD质粒中扩增获得Fe-SOD基因；设计引物从含ScFv的T-ScFv质粒扩增获得ScFv基因；酶切Fe-SOD基因和ScFv基因后重组得到SOD-ScFv融合基因，并重组进pET28a(+)质粒载体，构建得到Pet-SOD-ScFv融合载体，转化至感受态大肠杆菌BL21，得到Pet-SOD-ScFv工程菌；加入IPTG和Fe3+诱导，SOD-ScFv获得表达。利用本发明，SOD-ScFv获得高效表达，提高了SOD对肿瘤细胞的识别、定位和透膜能力。 |
| 国际公布 |
