| 公开(公告)号 | CN1237175C |
| 公开(公告)日 | 2006.01.18 |
| 申请(专利)号 | CN98812925.6 |
| 申请日期 | 1998.11.10 |
| 专利名称 | 在转基因苜蓿植株中的蛋白生产 |
| 主分类号 | C12N15/82(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/82(2006.01)I;C07K14/075(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;C12Q1/02(2006.01)I;A01H1/04(2006.01)I;A01H5/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 1997.11.10 CA 2220563 |
| 申请(专利权)人 | 加拿大农业及农业食品部;赫马-魁北克公司;拉瓦尔大学 |
| 发明(设计)人 | L·-P·维兹纳;S·拉伯格;R·巴津;H·克豪迪;R·莱米乌克斯;G·阿拉德 |
| 地址 | 加拿大魁北克省 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | 1998-11-10 PCT/CA1998/001055 |
| 进入国家日期 | 2000.07.04 |
| 专利代理机构 | 中国专利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 谭明胜 |
| 国省代码 | 加拿大;CA |
| 主权项 | 可提取蛋白的稳定生产方法，其包括：a)提供一种被转化的苜蓿植株，其包含一种载体，所述载体包含编码所述蛋白的基因，其中所述植株的基因型：i)是多年生的；ii)显示胚胎发生潜力；iii)是可转化的；并且iv)在至少3小时期间内在提取物中表现出可忽略的蛋白水解活性；b)培育所述被转化的苜蓿植株，使所述基因表达以产生所述蛋白；c)收获所述被转化的苜蓿植株或被转化的苜蓿植株的子代的地上部分，所述子代是由所述被转化的苜蓿植株的繁殖体产生的；d)从步骤c)中收获的地上部分的组织中提取所述蛋白；e)使所述被转化的苜蓿植株或被转化的子代苜蓿植株再生长地上部分；并且f)重复步骤c)至e)以连续地、稳定地提供所述蛋白。 |
| 摘要 | 本发明涉及特征鉴定适用于生产功能性转基因蛋白的宿主系统，所述功能性转基因蛋白用于需要政府管理批准的应用，诸如抗人IgG。众所周知，管理机构要求用于生产转基因蛋白的主细胞库和主细胞系是稳定和持久的，以确保足够的材料用于合适的特征鉴定、临床试验和潜在的销售。目前的植物生产系统需要建立用于此目的的种子库。然而，有许多缺点与用于生产持续可靠的转基因蛋白源的这种系统相关。本发明的一方面涉及特征鉴定适用于符合严格管理要求的转基因蛋白的植物生产系统。本发明的另一方面例举了通过在转基因苜蓿植株中表达相应的基因，生产和特征鉴定用作血清试剂的抗人IgG。将人IgG特异性IgG2a(κ)鼠mAb(C5-1)的重链和轻链的cDNA通过农杆菌感染转移入苜蓿中。获得了表达编码轻链和重链的mRNA的转基因植株，发现来自F1子代(通过有性杂交获得的)的植株表达完全装配的C5-1。此外，所述转基因蛋白在体内以及在提取和纯化步骤期间是稳定的。纯化产生独特的H2L2形式，在标准化血清学试验中其反应性不可与杂交瘤衍生C5-1的反应性区分。结果表明，植物衍生的转基因蛋白诸如mAb可以与杂交瘤衍生的mAb一样有效地用作诊断试剂，并且证明转化的苜蓿系统生产大量蛋白(包括诸如mAb的多体蛋白)的有用性。 |
| 国际公布 | 1999-05-20 WO1999/024592 英 |
