| 公开(公告)号 | CN1264977C |
| 公开(公告)日 | 2006.07.19 |
| 申请(专利)号 | CN02117823.2 |
| 申请日期 | 2002.05.22 |
| 专利名称 | 一种蚯蚓DNA酶及其提取方法 |
| 主分类号 | C12N9/22(2006.01)I |
| 分类号 | C12N9/22(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 上海克仑生物工程有限公司 |
| 发明(设计)人 | 牛 勃;杨利军;杨 琦;向 前;闫占清;胡晓年;刘晓玲;杨 涛;常冰梅 |
| 地址 | 201203上海浦东张江高科碧波路328号B座110室 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京华科联合专利事务所 |
| 代理人 | 杨 厚;王 为 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种蚯蚓DNA酶及其提取方法，其特征包括蚯蚓除毒、细胞破碎、盐析、脱盐、凝胶过滤、层析步骤，具体步骤如下：A、蚯蚓除毒，是先将蚯蚓洗尽，浸泡两日，至其体内泥土完全排出，身体呈洁净半透明状，再用20v电脉冲刺激排除蚯蚓体内多种有害微生物及其毒素，及时更换盐溶液浸泡3至4次，直至无肉眼可见黄色毒液分泌为止；B、细胞破碎，是将上述无毒蚯蚓用超声细胞破碎器进行匀浆，再用高速冷冻离心机离心，将过夜抽提液在pH5.4环境下，4℃，12000转离心20分钟，可见试管中淡黄色澄清透明的上清液和管底褐色混浊的沉淀物；C、盐析，是采用硫酸氨分段进行：盐析温度4℃、pH5.4、时间18小时；弃40％饱和度时的沉淀和70％饱和度时的上清液，收集70％饱和度时沉淀蛋白，即有DNA酶活性部分；D、脱盐、凝胶过滤，层析，其中层析采用DEAE阴离子交换层析，洗脱条件是：20mMTris盐酸，pH8.0，0-0.1MNacl，24ml/小时洗脱速度；收集0-0.1M/LNacl范围的活性峰洗脱液，即可得到一种层析纯或电泳纯DNA酶，分子量为45000±300道尔顿的蛋白。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种高效稳定的蚯蚓DNA酶及其提取方法，此酶可将环状的质粒DNA、链状的嗜菌体DNA、鲑精DNA、小牛血清DNA降解成小核苷酸片段，化学性质稳定，最适温度在41℃左右，耐高温，90℃三小时活性无明显改变，最适pH值为5.4左右，Mn，Mg，Ba等大部分重金属离子对其有较强的激活作用，提取该酶的方法包括蚯蚓除毒、细胞破碎、盐析、脱盐、层析、凝胶过滤等六步骤，此酶生产工艺简单，产量高，成本低，化学性质稳定，易保存运输，该提取方法提取DNA酶量大，纯度高，实验设备要求简单，具有广泛的应用前景。 |
| 国际公布 |
