| 公开(公告)号 | CN1291031C |
| 公开(公告)日 | 2006.12.20 |
| 申请(专利)号 | CN200410077749.2 |
| 申请日期 | 2004.12.29 |
| 专利名称 | 重组胸腺素α1的制备方法 |
| 主分类号 | C12P21/02(2006.01)I |
| 分类号 | C12P21/02(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中山大学 |
| 发明(设计)人 | 徐安龙;姜孝玉;李 靖;于 琳;王 妍;陈尚武;王 磊;董美玲 |
| 地址 | 510275广东省广州市新港西路135号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州新诺专利商标事务所有限公司 |
| 代理人 | 华 辉 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 重组胸腺素α1的制备方法，其特征在于：选用大肠杆菌作为工程菌，按照以下步骤进行(1)具有大肠杆菌工程菌密码子偏好性胸腺素α1基因的融合表达载体的构建：(1.a)按大肠杆菌密码子偏好性化学合成胸腺素α1基因，其核苷酸序列为5’-TCTGAT GCT GCG GTC GAT ACC AGC AGT GAA ATA ACT ACG AAA GAC TTA AAAGAAAAG AAA GAG GTT GTG GAA GAA GCC GAG AAC-3’：(1.b)以5’-GGGGTACCTCTGATGCTGCGGTCGAT-3’为上游引物、5’-GTCAT GCGGCCGCGTTCTCGGCTTCTTCCACAA-3’为下游引物，扩增出目的基因片段；(1.c)目的基因片段通过酶切后，将目的基因定向克隆到原核融合表达载体pTRX上，构建融合表达质粒pTRX-Tα1。(2)工程菌的构建及发酵培养：(2.a)将上述的融合表达质粒pTRX-Tα1转化大肠杆菌；(2.b)大肠杆菌工程菌发酵培养；(3)重组胸腺素α1的制备与纯化。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种重组胸腺素α1的制备方法：按大肠杆菌密码子偏好性化学合成胸腺素α1基因，扩增出目的基因片段，将目的基因定向克隆到原核融合表达载体pTRX上，构建融合表达质粒pTRX-Tα1。含表达质粒pTRX-Tα1的工程菌可表达出硫氧还蛋白—胸腺素α1融合蛋白，通过亲和层析和离子交换层析纯化融合蛋白，肠激酶酶切释放出Tα1，再通过亲和层析和HPLC纯化出Tα1。试验结果表明，Tα1的生物学活性与化学合成的胸腺素α1(日达仙)相当。 |
| 国际公布 |
