| 公开(公告)号 | CN1242059C |
| 公开(公告)日 | 2006.02.15 |
| 申请(专利)号 | CN97192081.8 |
| 申请日期 | 1997.01.31 |
| 专利名称 | rDSPAα1的产生方法 |
| 主分类号 | C12N9/72(2006.01)I |
| 分类号 | C12N9/72(2006.01)I;C07K1/16(2006.01)I;A61K38/49(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 1996.2.5 US 08/597,059 |
| 申请(专利权)人 | 舍林股份公司 |
| 发明(设计)人 | M·麦克曼;E·庞戈;C·索德斯;M·P·谭 |
| 地址 | 联邦德国柏林 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | 1997-01-31 PCT/EP1997/000441 |
| 进入国家日期 | 1998.08.05 |
| 专利代理机构 | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 |
| 代理人 | 李 瑛 |
| 国省代码 | 德国;DE |
| 主权项 | 一种从生物培养基中纯化重组圆形叶口蝠(Desmodusrotundus)唾液纤溶酶原活化剂α1的方法，所说的方法包括下列步骤：(a)在pH为4-7的条件下将培养基加入到阳离子交换树脂上，其中阳离子交换树脂由用羧基或者羧烷基基团衍生化的硅凝胶微粒、交联琼脂糖或者交联聚甲基丙烯酸酯聚合物组成；(b)洗涤阳离子交换树脂以除去非重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1蛋白和非蛋白杂质，其中洗涤缓冲液pH7.5，具有100mM乙酸钠和50mMNa3PO4；(c)从阳离子交换树脂选择性地洗脱结合的重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1，其中洗脱缓冲液含有50mMNa3PO4和100mM-500mMNaCl，pH为7.5的缓冲液或相同离子强度的缓冲液；(d)在pH为3-5的条件下将步骤(c)中的含有重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1的洗脱液加入到疏水作用树脂上，其中疏水作用树脂是一种不带电荷的的树脂，其用长度为1-10个碳原子的烷基链或者芳基-烷基基团衍生化；(e)洗涤疏水作用树脂以除去非重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1蛋白和非蛋白杂质，其中洗涤缓冲液为含有20mMHCl的溶液和含有19％乙醇的20mMHCl的溶液；(f)从疏水作用树脂选择性地洗脱结合的重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1，其中洗脱缓冲液含有20mMHCl，pH2.5并具有大于25％的乙醇浓度；(g)在pH1-4和20mMHCl的低离子强度的条件下将步骤(f)中的含有重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1的洗脱液加入到亲和层析树脂上，其中亲和层析树脂由以直径为25-75μm的珠形式的烯丙基葡聚糖和N，N′-亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚物组成；(h)洗涤亲和层析树脂以除去非重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1蛋白和非蛋白杂质，其中洗涤由具有20mMHCl的缓冲液完成；(i)从亲和层析树脂选择性地洗脱结合的重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1，以产生水溶液形式的纯化的重组圆形叶口蝠唾液纤溶酶原活化剂α1，其中洗脱缓冲液含有pH3-6的200mM甘氨酸的缓冲液或为具有相等离子强度的缓冲液。 |
| 摘要 | 以商业量和符合临床标准的纯度产生了rDSPAα1。该产生方法使用了一系列层析步骤：阳离子交换层析，其后为疏水作用层析，最后为亲和层析。 |
| 国际公布 | 1997-08-14 WO1997/029188 英 |
