| 公开(公告)号 | CN1242063C |
| 公开(公告)日 | 2006.02.15 |
| 申请(专利)号 | CN200310108141.7 |
| 申请日期 | 2003.10.24 |
| 专利名称 | 具有绿色荧光蛋白示踪和抗性筛选标记的RNAi载体pGO |
| 主分类号 | C12N15/63(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/63(2006.01)I;C12N15/79(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 发明(设计)人 | 王红阳;鄢和新;张 瑞;陈 磊;吴孟超 |
| 地址 | 200433上海市杨浦区翔殷路800号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海新天专利代理有限公司 |
| 代理人 | 丁振英 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种RNAi载体pGO，制备方法如下：(1)将pEGFP-C2载体用同尾酶BglII和BamHI双酶切切除EGFP和SV40polyA之间多个常用酶切位点BglII、XholI、HindIII、EcoRI、SalI、BamHI，保留酶切位点MluI及主要构件pUC复制起点pUCori、f1复制起点flori、细菌启动子P、卡那霉素基因/新霉素抗性基因Kan/Neo、HSV-TKPolyA、CMV启动子、增强绿色荧光蛋白基因EGFP、SV40PolyA、SV40早期启动子；(2)以HEK293细胞基因组DNA为模板，用上游引物5’-CCGACGCGTAGATCTAAGGTCGGGCAGGAAGAG-3’和下游引物5’-CCGACGCGTCTCGAGGAATTCGGATCCGTCGACAAAAAGAAGACCACGGTGTTTCGTCCTTTC-3’扩增人源U6启动子，其中在上游和下游引物中分别引入MluI酶切位点，在下游引物中引入多克隆位点XhoI、EcoRI、BamHI、SalI和BbsI；(3)将人源U6启动子经MluI酶切后插入上述(1)改造后pEGFP-C2的酶切位点MluI，即得pGO。 |
| 摘要 | 本发明涉及医药分子生物学技术领域，是一种可用于特异性抑制靶基因表达的具有绿色荧光蛋白示踪和真核细胞抗性筛选标记的RNA干扰(RNAi)载体pGO。本发明RNAi载体pGO是对pEGFP-C2载体的改造，去除了其原有的多克隆位点，在SW0 polyA和f1原核复制起点之间插入带有相应多克隆位点的U6启动子构成。只要在U6启动子下游的多克隆位点中的适当位点插入针对靶基因的siRNA模板，转染细胞后就可特异并有效地抑制该基因的表达。因而本发明的RNAi载体pGO可用于制备研究基因功能的试剂或用于抗肿瘤药物的研究和开发。 |
| 国际公布 |
