| 公开(公告)号 | CN1195055C |
| 公开(公告)日 | 2005.03.30 |
| 申请(专利)号 | CN01131190.8 |
| 申请日期 | 2001.09.06 |
| 专利名称 | 从胎盘组织中提取造血干细胞用于建立造血干细胞库的新方法 |
| 主分类号 | C12N5/08 |
| 分类号 | C12N5/08;A61K35/50;A61P7/06 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 周胜利;胡玉兰 |
| 发明(设计)人 | 周胜利;宋剑秋;胡玉兰 |
| 地址 | 100085 北京市海淀区清林园4号楼2单元601号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种从胎盘组织中提取造血干细胞用于建立造血干细胞库的方法，所述方法分为收集步骤、检测步骤、提取步骤、浓缩纯化步骤的过程，其分别为：(1)收集步骤：收集脐带血及胎盘并附着条形码标签且存放于4℃冰箱，不超过24小时；(2)检测步骤：对所冷冻的脐带血及胎盘提取样本并进行如下检测，肝炎病毒及相应抗体、性病检测、爱滋病(AIDs)毒抗体检测、遗传性溶血性疾病、有核白细胞及单个核细胞计数、造血干/祖细胞定量检测(CD34)、组织配型(HLA)、造血干/祖细胞定性检测(CFU-GM)的检测；(3)提取步骤：对胎盘组织在无菌的环境和条件下，用无菌生理盐水清洗胎盘，清洗掉所有的血凝块及积血，采用消毒剂杀灭任何可能的细菌污染；再次应用磷酸缓冲液(PH7.4)，低分子右旋糖酐及细胞培养液(DMEM)按顺序清洗；将经选择后的脐带血浆、DMEM培养液和胎盘细胞共同混和过夜；剪除脐带和表层的胎盘膜，应用撕裂，研磨和DMEM冲洗的方法将胎盘细胞收集到50毫升的离心管内，在离心机内以1000rpm，5分钟，4℃离心，弃去上清液；采用16G、18G和20G的针头过滤，将胎盘细胞制成单个细胞；将制备后的胎盘细胞做以下检测：细胞和霉菌培养，有核白细胞及单个核细胞计数，造血干/祖细胞定量检测(CD34)，造血干/祖细胞定性检测(CFU-GM)，造血干/祖细胞的活性(台盼兰染色)；将检测后的胎盘组织的胎盘细胞制取的单个核细胞以1×108/ml和DMSO混合，且以10％的DMSO和低分子右旋糖酐浓度，在液氮低度降温到零下80℃，然后转移到液氮(-186℃)液相中深低温保存；(4)浓缩纯化步骤：将提取的胎盘组织细胞和羟乙基淀粉按1∶6比例混合；在离心机中以500g离心10分钟，去掉红细胞；和淋巴细胞分离液按1∶4的比例混合；在离心机中以1000g离心30分钟，去掉残存红细胞以及成熟的粒细胞；收集和洗涤各个不同发育阶段的造血干细胞群；建立干细胞库。 |
| 摘要 | 本发明所要解决的技术问题是提供了从健康产妇的胎盘中提取干细胞建立造血干细胞库的方法。本发明变废为宝，采用机械、酶消化及单克隆抗体-磁珠法从胎盘中提取、浓缩和纯化活性好、浓度高、数量多的血液干细胞。经细胞培养，细胞标记检测和动物实验表明，胎盘中提取的干细胞能加强造血干细胞移植的短期和长期长活。从而可用于冻存建立胎盘和脐带血造血干细胞库，在胎盘供者本人(自体)或其他人(异体)患各种造血干细胞移植适应症时应用，也可结合着各种细胞生长因子在临床上开展细胞修复。本发明为临床提供了造血干细胞和干细胞的新来源，促进了细胞移植和组织修复的发展。 |
| 国际公布 |
