| 公开(公告)号 | CN1528884A |
| 公开(公告)日 | 2004.09.15 |
| 申请(专利)号 | CN200310106662.9 |
| 申请日期 | 2003.10.16 |
| 专利名称 | 鸡大肠杆菌异型外膜蛋白细胞工程菌株的制备方法 |
| 主分类号 | C12N1/20 |
| 分类号 | C12N1/20;C12N15/03;C12N15/31;C07K14/245;A61K39/108;//(C12N1/20,C12R1∶19) |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 天津市畜牧兽医研究所 |
| 发明(设计)人 | 丁伯良;鄢明华;王英珍;黄金海;李秀丽 |
| 地址 | 300112天津市西站西杨庄大堤外天津市畜牧兽医研究所 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 天津市杰盈专利代理有限公司 |
| 代理人 | 王念冬 |
| 国省代码 | 天津;12 |
| 主权项 | 一种鸡大肠杆菌异型外膜蛋白细胞工程菌株的制备方法，具有如下步骤：首先进行细菌分离，将病料接种、培养，分离出的细菌冻存备用；第二步是对分离出的细菌进行鉴定，选出优势血清型O78、O88、O2、O45、O53、O145；第三步提取优势血清型菌株外膜蛋白(OMPs)，找出同一血清型的菌株属于完全不同的OMP型，而血清型不同的菌株也为同一OMP型的分离株；第四步是制备原生质体融合出亲本菌株，即选取两对相互之间的血清型和OMP型都不相同的菌株，将它们选作进行原生质体融合的亲本菌株；筛选融合子选择标记并确定亲本菌株：选择两对相互之间的血清型和OMP型都不相同，而对卡那霉素(K+)和氨苄西林(Amp+)交叉耐药的菌株，作为融合子的筛选标记，将它们选作进行原生质体融合的亲本菌株。第五步制备原生质体，用溶菌酶浓度为6g/L，作用时间为25min；原生质体融合后，培养2-3天形成中等大小菌落，得到鸡大肠杆菌异型外膜蛋白细胞工程菌株，R1：OMP-1+OMP-3，O78+O2；R2：OMP-1+OMP-2，O78+O88。 |
| 摘要 | 一种鸡大肠杆菌异型外膜蛋白细胞工程菌株的制备方法，首先将病料接种、培养，分离出的细菌冻存备用；二是选出优势血清型；三提取优势血清型菌株外膜蛋白，找出同一血清型的菌株属于完全不同的外膜蛋白型，血清型不同的菌株也为同一外膜蛋白型的分离株；四是制备原生质体融合出亲本菌株，选择两对相互之间的血清型和外膜蛋白型都不相同的菌株，作为融合子的筛选标记，将它们选作进行原生质体融合的亲本菌株；然后制备原生质体，原生质体融合后，培养形成中等大小菌落，得到鸡大肠杆菌异型外膜蛋白细胞工程菌株。 |
| 国际公布 |
