| 公开(公告)号 | CN1289678C |
| 公开(公告)日 | 2006.12.13 |
| 申请(专利)号 | CN02109840.9 |
| 申请日期 | 2002.06.13 |
| 专利名称 | 高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产及用途 |
| 主分类号 | C12N15/81(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I;C12N9/36(2006.01)I;C12N15/56(2006.01)I;A61K38/47(2006.01)I;A61P31/00(2006.01)I;A61P31/04(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 长春奇龙生物技术研究所;香港国升实业有限公司;深圳市九益祥实业有限公司 |
| 发明(设计)人 | 安 米;张 华;李 元;安献禄 |
| 地址 | 130022吉林省长春市人民大街179－12号B座13楼3号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 王 薇 |
| 国省代码 | 吉林;22 |
| 主权项 | 一种基因重组人溶菌酶的生产方法，其特征在于：基因工程人溶菌酶的提取纯化工艺：将含有基因工程表达的人溶菌酶的毕赤酵母菌培养液用10-50万截流分子量膜超滤，收集滤液；用5000截流分子量超滤，收集浓液；浓液上羧甲基纤维素，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液，过G-50柱除盐，冰冻干燥，测定蛋白量和溶菌酶活性；生产步骤如下：1、摇床种子制备：以配制200毫升培养基为基准，用H3PO4(磷酸)6毫升、MgSO4(硫酸镁)3克，K2SO4(硫酸钾)4克，KOH(氢氧化钾)1克，CaSO42H2O(硫酸钙)1.5克等成份，加蒸馏水至200毫升，高压来菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟250转，培养温度为20-35℃，在恒温床上培养36-48小时；2、种子罐培养：以种子罐最大体积1升为基准，配制培养基用H3PO4(磷酸)27毫升，MgSO4(硫酸镁)15克，CaSO42H2O(硫酸钙)0.6克，K2SO4(硫酸钾)18克KOH(氢氧化钾)4.12克，加蒸馏水至500毫升，高压来菌后接种摇床种子；发酵反应器操作参数温度为20-32℃，PH值为2.0-8.0。溶解氧浓度为10-60％；当培养液中的细胞密度提高至OD200左右，种子培养结束；3、生产罐培养：以10升为生产罐配制培养基，用H3PO4(磷酸)95毫升，MgSO4(硫酸镁)53克，CaSO42H2O(硫酸钙)21克，K2SO4(硫酸钾)63克，KOH(氢氧化钾)15克加蒸馏水至7升，高压来菌后接种种子罐种子，发酵反应器操作参数为温度控制在25-32℃，PH值为4.0-8.0，溶解氧浓度为10-60％；当培养液中细胞达到一定密度后，向培养液中流加甲醇诱导，此阶段的持续时间50-60小时，然后放罐培养结束。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产方法及其新用途。提供了利用提取纯化的基因工程技术表达的人溶菌酶的溶菌活性，用于临床上细菌和真菌的感染，特别是耐药性细菌感染的治疗方法，以及革兰阴性菌感染治疗后内毒素引发的后遗症的治疗方法。提供了用于各种治疗用途的抗生素和人溶菌酶的药用组合物。 |
| 国际公布 |
