| 公开(公告)号 | CN1289691C |
| 公开(公告)日 | 2006.12.13 |
| 申请(专利)号 | CN03113853.5 |
| 申请日期 | 2003.03.04 |
| 专利名称 | 病原微生物诊断型基因芯片的快速检测方法 |
| 主分类号 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分类号 | C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军基因工程研究所 |
| 发明(设计)人 | 马文丽;郑文岭;石 嵘 |
| 地址 | 510515广东省广州市同和第一军医大学分子生物学研究所 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州知友专利商标代理有限公司 |
| 代理人 | 邵毓琴 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 病原微生物诊断型基因芯片的快速检测方法，包括以下步骤：(1)玻片的准备；(2)探针准备：采用PCR扩增病原体全基因组的各个基因和特异性片段，探针长度从数百到数千碱基不等，浓度在0.25～0.5μg/μL；(3)芯片制备：采用基因芯片点样仪进行点样；(4)打印后处理；(5)样品的处理：在PCR扩增过程中，采用Cy5-dUTP进行掺入标记，在标记前或标记后采用Sau3A I进行限制性酶切，使获得片段长度在200～600bps之间；其中，标记dNTP的配制为：三种dNTP的摩尔终浓度与另一种欲用荧光标记物替代的dNTP的摩尔终浓度比为5∶3，而荧光标记物cy5-dUTP与和其竞争性掺入的dTTP的摩尔浓度比是1∶3；(6)杂交：2×杂交缓冲液的配方为60％甲酰胺、12×SSC、0.24％SDS；(7)杂交后清洗；(8)扫描检测。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种病原微生物诊断型基因芯片的快速检测方法，包括以下步骤：(1)玻片的准备；(2)探针准备：采用PCR扩增病原体全基因组的各个基因和特异性片段，探针长度从数百到数千碱基不等，浓度在0.25～0.5μg/μL；(3)芯片制备：采用基因芯片点样仪进行点样；(4)打印后处理；(5)样品的处理：在PCR扩增过程中，Cy5-dUTP进行掺入标记，在标记前或标记后引入限制性酶切，使获得片段长度在200～600bps之间；(6)杂交：2×杂交明冲液的配方为60％甲酰胺、12×SSC、0.24％SDS；(7)杂交后清洗；(8)扫描检测。本发明具有标记效率高、杂交检测结果稳定、杂交时间大大病短等优点，可将杂交时间从传统的16～20小时缩短到10分钟，尤其适用于临床感染性疾病的诊断。 |
| 国际公布 |
