| 公开(公告)号 | CN1596268A |
| 公开(公告)日 | 2005.03.16 |
| 申请(专利)号 | CN02823601.7 |
| 申请日期 | 2002.11.26 |
| 专利名称 | 重组人红细胞生成素的层析纯化 |
| 主分类号 | C07K14/505 |
| 分类号 | C07K14/505 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 2001.11.28 US 60/333,839 |
| 申请(专利权)人 | 桑多斯有限公司 |
| 发明(设计)人 | P·埃利格尔;N·帕尔马 |
| 地址 | 奥地利昆德 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | PCT/EP2002/013299 2002.11.26 |
| 进入国家日期 | 2004.05.27 |
| 专利代理机构 | 北京市中咨律师事务所 |
| 代理人 | 黄革生;林柏楠 |
| 国省代码 | 奥地利;AT |
| 主权项 | 一种从包含宿主细胞的细胞培养基回收和纯化重组人红细胞生成素(rhEpo)的方法，该方法包括步骤：(a)通过进行选自(i)离心后深度过滤，(ii)深度过滤，和(iii)离心的方法，从细胞培养基除去宿主细胞、细胞成分和碎片以获得澄清的培养基上清液；(b)调节上清液的电导率到5mS/cm或以下，并调节pH至约7.0到8.0之间；(c)将步骤(b)得到的上清液加到包含阴离子交换层析介质的柱上，洗柱子，从柱上洗脱rhEpo，收集含有rhEpo的峰级分；(d)利用可在中等压力(＜10bar)下运行并且可以抵抗高浓度NaOH的树脂，将来自步骤(c)的合并的峰级分进行反相层析步骤，利用有机溶剂的线性梯度洗脱rhEpo；(e)将步骤(d)中洗脱的一个或多个含有rhEpo的级分加到包含阴离子交换层析介质的柱上，洗柱子，利用线性盐梯度洗脱rhEpo；(f)根据rhEpo的唾液酸化程度，选择步骤(e)中洗脱的一个或多个含有rhEpo的级分；和(g)利用凝胶过滤介质，将一个或多个步骤(f)中洗脱的含有rhEpo的级分进行一个或多个大小排阻层析步骤以除去潜在的二聚体和更高的聚集体；收集含有rhEpo的洗脱物。 |
| 摘要 | 本发明提供了一种从包含宿主细胞的细胞培养基回收和纯化重组人红细胞生成素(rhEpo)的方法，该方法包括步骤：(a)通过利用盘叠式分离器离心，接着深度过滤步骤，从细胞培养基除去宿主细胞、细胞成分和碎片以获得澄清的培养基上清液；(b)调节上清液的电导率到5mS/cm或以下，而调节pH至约7.0到8.0之间；(c)将步骤(b)得到的上清液加到包含阴离子交换层析介质的柱上，洗柱子，从柱上洗脱rhEpo，收集含有rhEpo的峰级分；(d)利用可以在中等压力(＜10bar)下运行并且可以抵抗高浓度NaOH的聚苯乙烯树脂，如Source 30 RPC，将步骤(c)得到的合并的峰级分进行反相层析步骤，利用有机溶剂的线性梯度洗脱rhEpo；(e)将步骤(d)中洗脱的一个或多个含有rhEpo的级分加到包含Q-Seph HP阴离子交换层析介质的柱上，洗柱子，利用线性盐梯度洗脱rhEpo；(f)根据rhEpo的唾液酸化程度，选择一个或多个步骤(e)中洗脱的含有rhEpo的级分；和(g)利用Superdex 75 prep grade，将一个或多个步骤(f)中洗脱的含有rhEpo的级分进行一个或多个大小排阻层析步骤以除去潜在的二聚体和更高的聚集体；收集含有rhEpo的洗脱物。 |
| 国际公布 | WO2003/045996 英 2003.6.5 |
