| 公开(公告)号 | CN100340667C |
| 公开(公告)日 | 2007.10.03 |
| 申请(专利)号 | CN200410051403.5 |
| 申请日期 | 2004.09.09 |
| 专利名称 | 用于RNA干扰研究的表达载体 |
| 主分类号 | C12N15/79(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/79(2006.01)I;C12N15/861(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 广东省人民医院 |
| 发明(设计)人 | 单志新;余细勇;林秋雄 |
| 地址 | 510080广东省广州市中山二路106号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州粤高专利代理有限公司 |
| 代理人 | 陈 卫 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种用于表达siRNA的重组腺病毒质粒载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将小鼠U6RNA聚合酶III启动子序列取代真核表达载体的启动子序列，构建PolIII重组真核表达载体；(2)根据目标siRNA序列，制备其对应DNA模板序列；(3)将DNA模板序列定向插入PolIII重组真核表达载体的BamHI和XhoI或NotI或EcoRV位点间，构建siRNA表达载体；(4)将小鼠U6RNA聚合酶III启动子序列，取代腺病毒穿梭质粒载体的启动子序列，构建成重组腺病毒穿梭质粒载体；(5)根据PolIII重组真核表达载体和重组腺病毒穿梭质粒载体的PolIII启动子上下游单一的SpeI和XhoI或NotI或EcoRV识别位点，将步骤(3)所构建的siRNA表达载体中包含目标siRNA的DNA模板序列片段亚克隆到重组腺病毒穿梭质粒载体中，构建重组腺病毒质粒载体。 |
| 摘要 | 本发明公开了用于RNA干扰研究的表达载体。本发明对真核表达载体和腺病毒穿梭质粒载体进行了启动子的序列改造。经过启动子改造的真核表达载体上有polIII启动子，可以在真核细胞中表达siRNA；经过启动子改造的腺病毒穿梭质粒载体上有一致的polIII启动子及两侧序列，可将构建于经过启动子改造的真核表达载体上的目的序列亚克隆到经过启动子改造的腺病毒穿梭质粒载体上，进而制备可表达siRNA的重组腺病毒质粒载体，在细胞及整体动物水平上进行RNA干扰的实验研究，可以大大缩短实验周期，提高研究效率。 |
| 国际公布 |
