| 公开(公告)号 | CN100340656C |
| 公开(公告)日 | 2007.10.03 |
| 申请(专利)号 | CN02136853.8 |
| 申请日期 | 2002.09.06 |
| 专利名称 | 人γ-干扰素在毕赤酵母菌中的高效表达、发酵和纯化 |
| 主分类号 | C12N1/19(2006.01)I |
| 分类号 | C12N1/19(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N15/23(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 上海擎天生物制药技术开发有限公司 |
| 发明(设计)人 | 陈国富 |
| 地址 | 200000上海市浦东张江高科技园区郭守敬路351号2号楼624－6室 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海浦一知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 丁纪铁 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种由基因工程菌发酵制备人γ-干扰素的方法，其特征在于，基因结构如下的人γ-干扰素基因序列，ATGCAAGACCCATACGTCAAGGAGGCAGAAAACTTGAAGAAATATTTTAACGCTGGTCATMQDPYVKEAENLKKYFNAGHTCTGACGTGGCAGACAATGGAACATTATTTTTGGGTATTTTGAAGAAGTGGAAAGAAGAGSDVADNGTLFLGILKNWKEETCAGATAGAAAGATTATGCAATCCCAGATCGTCTCCTTCTACTTCAAGCTTTTCAAGAACSDRKIMQSQIVSFYFKLFKNTTCAAAGATGATCAATCCATCCAAAAATCCGTTGAGACAATCAAAGAGGATATGAATGTCFKDDQSIQKSVETIKEDMNVAAGTTCTTTAACTCTAATAAGAAGAAGCGTGATGACTTTGAGAAGTTGACCAATTACTCAKFFNSNKKKRDDFEKLTNYSGTTACAGACTTGAATGTCCAACGTAAGGCAATCCACGAGCTGATTCAAGTGATGGCAGAAVTDLNVQRKAIHELIQVMAECTTTCTCCAGCTGCTAAAACCGGAAAGAGAAAGAGGTCTCAAATGTTGTTTAGAGGAAGALsPAAKTGKRKRAQMLFRGRCGTGCTTCTCAATAGRASQTerm克隆插入带有甲醇调节型启动子AOX1的载体pPIC3.5K中，获得表达载体pPIC3.5K-ifn，采用蛋白酶缺陷的毕赤酵母SMD1163为宿主，用G418抗性浓度递增法筛选多拷贝克隆，得高表达毕赤酵母株(PichiaPastoris)SMD1163(pPIC3.5K-ifn，his4pep4Δprbl)-181CGMCCNO.0758，经发酵，纯化得人γ-干扰素。 |
| 摘要 | 设计并人工合成了特别适合于毕赤酵母菌(Pichia pastoris)中表达的人γ-干扰素的基因序列，构建了胞内表达人γ-干扰素蛋白的载体pPIC3.5K-ifn，采用蛋白酶缺陷的毕赤酵母SMD1163为宿主菌，用G418抗性浓度递增法筛选多拷贝克隆，得高表达克隆株Pichia pastoris SMD1163(Ppic3.5K-ifn，his4 pep4 Δprb1)-181。该菌在28-30℃不含甲醇的培养基培养48小时，再在含1％的甲醇的诱导培养基培养36-48小时，γ-干扰素表达量可达菌体总蛋白的25％。每升含γ-干扰素初品约为1克左右。经DEAE-Sepharose凝胶吸附，Sephacry S-200分子筛层析，DEAE-Sepharose阴离子交换层析，CM-Sepharose阳离子交换层析，得纯度为97.5％以上(HPLC)的人γ-干扰素蛋白。 |
| 国际公布 |
